De Kiefernematod ass e Quarantän-Migratiounsendoparasit, deen bekannt ass fir schwéier wirtschaftlech Verloschter a Kieferbësch-Ökosystemer ze verursaachen. Déi aktuell Studie iwwerpréift d'nematizid Aktivitéit vun halogenéierten Indolen géint Kiefernematoden an hire Wierkungsmechanismus. Déi nematizid Aktivitéite vu 5-Iodoindol an Avermectin (positiv Kontroll) géint Kiefernematoden waren ähnlech an héich bei niddrege Konzentratiounen (10 μg/mL). 5-Iodoindol huet d'Fruchtbarkeet, d'Reproduktiounsaktivitéit, d'Embryonal- a Larvestermortalitéit an d'Lokomotorikverhalen reduzéiert. Molekular Interaktioune vu Liganden mat invertebratenspezifesche Glutamat-gesteierten Chloridkanalrezeptoren ënnerstëtzen d'Iddi, datt 5-Iodoindol, wéi Avermectin, enk un den aktiven Zentrum vum Rezeptor bindt. 5-Iodoindol huet och verschidde phenotypesch Deformatiounen an Nematoden induzéiert, dorënner anormalen Organkollaps/Schrumpfung an eng erhéicht Vakuoliséierung. Dës Resultater suggeréieren, datt Vakuolen eng Roll beim duerch Methylierung verursaachten Doud vun de Nematoden spille kënnen. Wichteg ass, datt 5-Iodoindol fir béid Planzenaarten (Kabes a Rettich) net gëfteg war. Dofir weist dës Studie, datt d'Applikatioun vu Iodoindol ënner Ëmweltbedingungen d'Verwelkungsschädigung vun der Kiefer kontrolléiere kann.
De Kiefernholznematod (Bursaphelenchus xylophilus) gehéiert zu de Kiefernholznematoden (PWN), migréierend endoparasitär Nematoden, déi bekannt sinn, fir schwéier ökologesch Schied un de Kieferbësch-Ökosystemer ze verursaachen1. D'Kieferwiltkrankheet (PWD), déi vum Kiefernholznematod verursaacht gëtt, gëtt zu engem eeschte Problem op verschiddene Kontinenter, dorënner Asien an Europa, an an Nordamerika zerstéiert den Nematoden agefouert Kieferaarten1,2. Den Réckgang vun de Kieferbeem ass e grousst wirtschaftlecht Problem, an d'Perspektiv vu senger globaler Verbreedung ass besuergnësserregend3. Déi folgend Kieferaarten ginn am heefegsten vum Nematoden attackéiert: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii a Pinus radiata4. De Kiefernnematod ass eng eescht Krankheet, déi Kieferbeem bannent Wochen oder Méint no der Infektioun ëmbrénge kann. Zousätzlech sinn Ausbréch vu Kiefernnematoden an enger Villfalt vun Ökosystemer heefeg, sou datt persistent Infektiounsketten etabléiert goufen1.
De Bursaphelenchus xylophilus ass e Quarantän-Planzeparasitär-Nematod, deen zu der Iwwerfamill Aphelenchoidea a Klad 102.5 gehéiert. Den Nematoden erniert sech vu Pilzen a reproduzéiert sech am Holzgewebe vu Kieferen, wouduerch hien a véier verschidde Larvestadien entwéckelt: L1, L2, L3, L4 an en erwuessent Individuum1,6. Ënner Bedingunge vu Liewensmëttelknappheet geet den Kieferennematod an e spezialiséiert Larvestadium – Dauer – iwwer, dat säi Vektor – de Kieferrindekäfer (Monochamus alternatus) – parasitéiert a sech op gesond Kieferen iwwerdroe gëtt. Bei gesonde Wirtsbeem migréieren d'Nematoden séier duerch d'Planzegewebe a ernieren sech vu parenchymesche Zellen, wat zu enger Rei vun Iwwerempfindlechkeetsreaktiounen, Verwelkung vun der Kiefer an dem Doud bannent engem Joer no der Infektioun féiert1,7,8.
Déi biologesch Bekämpfung vu Kiefernematoden ass zënter laangem eng Erausfuerderung, mat Quarantänmoossnamen, déi bis an d'20. Joerhonnert zréckginn. Déi aktuell Strategien fir d'Bekämpfung vu Kiefernematoden ëmfaassen haaptsächlech chemesch Behandlungen, dorënner Holzbegasung an Implantatioun vun Nematiciden an Bamstämm. Déi am meeschte verbreet Nematiciden sinn Avermectin an Avermectinbenzoat, déi zu der Avermectinfamill gehéieren. Dës deier Chemikalien si ganz effektiv géint vill Nematodenarten a gëllen als ëmweltfrëndlech9. Wéi och ëmmer, et gëtt erwaart, datt déi widderholl Notzung vun dësen Nematiciden e Selektiounsdrock schaaft, deen bal sécher zu der Entstoe vu resistente Kiefernematoden féiert, wéi et fir verschidde Schädlinge wéi Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella an d'Nematoden Trichostrongylus colubriformis an Ostertagia circumcincta gewisen gouf, déi lues a lues Resistenz géint Avermectine entwéckelt hunn10,11,12. Dofir mussen d'Resistenzmuster reegelméisseg ënnersicht an d'Nematiciden kontinuéierlech iwwerpréift ginn, fir alternativ, käschtegënschteg an ëmweltfrëndlech Moossname fir d'Bekämpfung vu PVD ze fannen. An de leschte Joerzéngten hunn eng Rei Autoren d'Benotzung vu Planzenextrakter, äthereschen Ueleger a flüchtege Substanzen als Mëttel fir d'Bekämpfung vu Nematoden virgeschloen13,14,15,16.
Mir hunn viru kuerzem déi nematizid Aktivitéit vun Indol, engem interzellulären a interkingdom Signalmolekül, a Caenorhabditis elegans 17 demonstréiert. Indol ass e wäit verbreeten intrazelluläre Signal an der mikrobieller Ökologie, deen eng Rei Funktiounen kontrolléiert, déi d'mikrobiell Physiologie, d'Sporebildung, d'Plasmidstabilitéit, d'Medikamenteresistenz, d'Biofilmbildung an d'Virulenz beaflossen 18, 19. D'Aktivitéit vun Indol a senge Derivater géint aner pathogen Nematoden ass net ënnersicht ginn. An dëser Studie hu mir déi nematizid Aktivitéit vun 34 Indolen géint Piniennematoden ënnersicht an de Wierkungsmechanismus vum potentsten 5-Iodoindol mat Hëllef vun der Mikroskopie, der Zäitlaffotografie an de molekulare Docking-Experimenter opgekläert, an seng toxesch Auswierkungen op Planzen mat Hëllef vun engem Somkeimungstest bewäert.
Et gouf virdru bericht, datt héich Konzentratioune (>1,0 mM) vun Indol en nematiziden Effekt op Nematoden hunn17. No der Behandlung vu B. xylophilus (gemëschte Liewensstadien) mat Indol oder 33 verschiddenen Indolderivaten an enger Konzentratioun vun 1 mM, gouf d'Mortalitéit vu B. xylophilus gemooss andeems lieweg an dout Nematoden an der Kontroll- a behandelter Grupp gezielt goufen. Fënnef Indolen hunn eng bedeitend nematizid Aktivitéit gewisen; d'Iwwerliewe vun der onbehandelter Kontrollgrupp war 95 ± 7% no 24 Stonnen. Vun den 34 getesteten Indolen hunn 5-Iodoindol a 4-Fluorindol an enger Konzentratioun vun 1 mM eng Mortalitéit vun 100% verursaacht, während 5,6-Difluorindigo, Methylindol-7-carboxylat a 7-Iodoindol eng Mortalitéit vun ongeféier 50% verursaacht hunn (Tabell 1).
Effekt vu 5-Iodoindol op d'Vakuolbildung an de Metabolismus vun engem Kiefernholznematod. (A) Effekt vun Avermectin an 5-Iodoindol op erwuesse männlech Nematoden, (B) L1-Stadium-Nematodeneeër an (C) Metabolismus vu B. xylophilus, (i) keng Vakuole goufen no 0 Stonnen observéiert, d'Behandlung huet zu (ii) Vakuolen, (iii) Akkumulatioun vu multiple Vakuolen, (iv) Schwellung vu Vakuolen, (v) Fusioun vu Vakuolen an (vi) Bildung vu risege Vakuolen gefouert. Rout Pfeiler weisen d'Schwellung vu Vakuolen, blo Pfeiler weisen d'Fusioun vu Vakuolen a schwaarz Pfeiler weisen riseg Vakuolen. Skala = 50 μm.
Zousätzlech huet dës Studie och de sequenziellen Prozess vum Methan-induzéierten Doud bei Kiefernematoden beschriwwen (Figur 4C). Methanogenen Doud ass eng net-apoptotesch Aart vu Zelltod, déi mat der Akkumulation vu prominente zytoplasmatesche Vakuolen assoziéiert ass27. Déi morphologesch Defekter, déi bei Kiefernematoden observéiert goufen, schéngen enk mam Mechanismus vum Methan-induzéierten Doud verbonnen ze sinn. Mikroskopesch Untersuchung zu verschiddenen Zäiten huet gewisen, datt sech no 20 Stonne Belaaschtung mat 5-Iodoindol (0,1 mM) riseg Vakuolen geformt hunn. Mikroskopesch Vakuolen goufen no 8 Stonne Behandlung observéiert, an hir Zuel ass no 12 Stonnen eropgaang. E puer grouss Vakuolen goufen no 14 Stonnen observéiert. E puer verschmolzene Vakuolen ware no 12-16 Stonne Behandlung kloer sichtbar, wat drop hiweist, datt d'Vakuolfusioun d'Basis vum methanogenen Doudsmechanismus ass. No 20 Stonne goufen e puer riseg Vakuolen am ganze Wuerm fonnt. Dës Observatioune stellen den éischte Bericht iwwer Metuose bei C. elegans duer.
Bei mat 5-Iodoindol behandelte Wiermer goufen och Vakuolaggregatioun a -ruptur observéiert (Fig. 5), wéi duerch d'Béien vun de Wiermer an d'Fräisetzung vun de Vakuolen an d'Ëmwelt beweist gëtt. Vakuolstéierung gouf och an der Eeërschuelmembran observéiert, déi normalerweis vum L2 während dem Ausschluede intakt erhale bleift (Ergänzungsfig. S2). Dës Observatioune ënnerstëtzen d'Bedeelegung vu Flëssegkeetsakkumulatioun an osmoreguléierungsversagen, souwéi reversibler Zellverletzung (RCI), am Prozess vun der Vakuolbildung an der Eeterbildung (Fig. 5).
Mir hunn d'Roll vum Jod an der observéierter Vakuolbildung hypothetiséiert an hunn d'nematizid Aktivitéit vun Natriumiodid (NaI) a Kaliumiodid (KI) ënnersicht. Wéi och ëmmer, bei Konzentratioune (0,1, 0,5 oder 1 mM) hunn si weder d'Iwwerliewe vun den Nematoden nach d'Vakuolbildung beaflosst (Ergänzungsfigur S5), obwuel 1 mM KI e liichte nematiziden Effekt hat. Op der anerer Säit huet 7-Iodoindol (1 oder 2 mM), wéi 5-Iodoindol, verschidde Vakuolen a strukturell Deformatiounen induzéiert (Ergänzungsfigur S6). Déi zwee Iodoindolen hunn ähnlech phenotypesch Charakteristiken a Piniennematoden gewisen, während NaI a KI dat net gemaach hunn. Interessanterweis huet Indol keng Vakuolbildung a B. xylophilus bei de geteste Konzentratioune induzéiert (Donnéeën net gewisen). Dofir hunn d'Resultater bestätegt, datt den Indol-Iod-Komplex fir d'Vakuoliséierung an de Metabolismus vu B. xylophilus verantwortlech ass.
Ënnert den Indolen, déi op nematizid Aktivitéit getest goufen, hat 5-Iodoindol den héchste Slip-Index vun -5,89 kcal/mol, gefollegt vu 7-Iodoindol (-4,48 kcal/mol), 4-Fluorindol (-4,33) an Indol (-4,03) (Figur 6). Déi staark Réckgrat-Wasserstoffbindung vu 5-Iodoindol mam Leucin 218 stabiliséiert seng Bindung, während all aner Indol-Derivater iwwer Säiteketten-Wasserstoffbindungen un Serin 260 bannen. Ënnert anere modelléierten Iodoindolen huet 2-Iodoindol e Bindungswäert vu -5,248 kcal/mol, wat op seng Haaptwaasserstoffbréck mam Leucin 218 zeréckzeféieren ass. Aner bekannt Bindungen enthalen 3-Iodoindol (-4,3 kcal/mol), 4-Iodoindol (-4,0 kcal/mol) a 6-Fluorindol (-2,6 kcal/mol) (Ergänzungsfigur S8). Déi meescht halogenéiert Indolen an den Indol selwer, mat Ausnam vu 5-Iodoindol an 2-Iodoindol, bilden eng Bindung mat Serin 260. D'Tatsaach, datt d'Waasserstoffbindung mat Leucin 218 eng Indikatioun fir eng effizient Rezeptor-Ligand-Bindung ass, wéi fir Ivermectin observéiert (Ergänzungsfigur S7), bestätegt, datt 5-Iodoindol an 2-Iodoindol, wéi Ivermectin, enk un den aktiven Zentrum vum GluCL-Rezeptor iwwer Leucin 218 bannen (Fig. 6 an Ergänzungsfigur S8). Mir proposéieren, datt dës Bindung néideg ass, fir déi oppe Porenstruktur vum GluCL-Komplex z'erhalen, an datt duerch enk Bindung un den aktiven Zentrum vum GluCL-Rezeptor, 5-Iodoindol, 2-Iodoindol, Avermectin an Ivermectin doduerch den Ionenkanal oppen halen an d'Flëssegkeetsopnam erlaben.
Molekular Andocking vun Indol an halogenéiertem Indol un GluCL. Bindungsorientéierunge vun den (A) Indol-, (B) 4-Fluorindol-, (C) 7-Iodoindol- an (D) 5-Iodoindol-Liganden un den aktiven Zentrum vu GluCL. D'Protein gëtt duerch e Band duergestallt, an d'Waasserstoffbindungen am Réckgrat sinn als giel gepunktete Linnen duergestallt. (A′), (B′), (C′) an (D′) weisen d'Interaktioune vun de korrespondéierende Liganden mat den ëmleienden Aminosaierreschter, an d'Waasserstoffbindungen an der Säitekette sinn duerch rosa gepunktete Pfeiler uginn.
Et goufen Experimenter duerchgefouert fir den toxeschen Effekt vu 5-Iodoindol op d'Keimung vu Kabes- a Rettichsomen ze evaluéieren. 5-Iodoindol (0,05 oder 0,1 mM) oder Avermectin (10 μg/mL) haten wéineg oder guer keen Effekt op d'initial Keimung an d'Entstoe vu Planzen (Figur 7). Zousätzlech gouf keen signifikanten Ënnerscheed tëscht der Keimungsquote vun onbehandelte Kontrollsomen a Somen fonnt, déi mat 5-Iodoindol oder Avermectin behandelt goufen. Den Effekt op d'Verlängerung vun de Pëtzwurzelen an d'Zuel vun de geformte Säitewuerzelen war onbedeitend, obwuel 1 mM (10 Mol seng aktiv Konzentratioun) vu 5-Iodoindol d'Entwécklung vu Säitewuerzelen liicht verzögert huet. Dës Resultater weisen datt 5-Iodoindol net gëfteg fir Planzenzellen ass an d'Planzenentwécklungsprozesser bei de studéierte Konzentratioune net stéiert.
Effekt vu 5-Iodoindol op d'Somekeimung. Keimung, Sprossen a lateral Verwuerzelung vu B. oleracea an R. raphanistrum Somen op Murashige a Skoog Agarmedium mat oder ouni Avermectin oder 5-Iodoindol. D'Keimung gouf no 3 Deeg Inkubatioun bei 22°C opgeholl.
Dës Studie bericht iwwer verschidde Fäll vum Nematodentdoud duerch Indolen. Wichteg ass, datt dëst den éischte Bericht iwwer Iodoindol ass, déi Methylierung (e Prozess, deen duerch d'Akkumulatioun vu klenge Vakuolen verursaacht gëtt, déi sech lues a lues zu risege Vakuolen iwwerginn, wat schlussendlech zu Membranruptur an Doud féiert) a Kiefernadelen induzéiert, woubäi Iodoindol bedeitend nematizid Eegeschafte weist, ähnlech wéi déi vum kommerziellen Nematizid Avermectin.
Et gouf virdru bericht, datt Indolen verschidde Signalfunktiounen a Prokaryoten an Eukaryoten ausüben, dorënner Biofilmhemmung/Bildung, bakteriell Iwwerliewe a Pathogenitéit19,32,33,34. An der leschter Zäit hunn déi potenziell therapeutesch Effekter vun halogenéierten Indolen, Indolalkaloiden an semisyntheteschen Indolderivater e grousst Fuerschungsinteresse op sech gezunn35,36,37. Zum Beispill gouf gewisen, datt halogenéiert Indolen persistent Escherichia coli- a Staphylococcus aureus-Zellen ëmbréngen37. Zousätzlech ass et vu wëssenschaftlechem Interessi, d'Effizienz vun halogenéierten Indolen géint aner Aarten, Gattungen a Kinnekräicher ze studéieren, an dës Studie ass e Schrëtt a Richtung vun dësem Zil.
Hei proposéiere mir e Mechanismus fir 5-Iodoindol-induzéiert Mortalitéit bei C. elegans baséiert op reversibler Zellverletzung (RCI) a Methylierung (Figuren 4C a 5). Ödematös Verännerungen wéi Schwellungen a vakuolär Degeneratioun sinn Indikatoren fir RCI a Methylierung, déi sech als riseg Vakuolen am Zytoplasma manifestéieren48,49. RCI stéiert d'Energieproduktioun andeems et d'ATP-Produktioun reduzéiert, e Versoen vun der ATPase-Pompel verursaacht oder Zellmembranen stéiert an e schnelle Flux vun Na+, Ca2+ a Waasser verursaacht50,51,52. Intrazytoplasmatesch Vakuolen entstinn an Déierzellen als Resultat vun der Flëssegkeetsakkumulatioun am Zytoplasma wéinst dem Flux vu Ca2+ a Waasser53. Interessanterweis ass dëse Mechanismus vum Zellschued reversibel, wann de Schued temporär ass an d'Zellen ufänken, ATP fir eng gewëssen Zäit ze produzéieren, awer wann de Schued bestoe bleift oder sech verschlechtert, stierwen d'Zellen.54 Eis Observatioune weisen, datt Nematoden, déi mat 5-Iodoindol behandelt goufen, net fäeg sinn, déi normal Biosynthese no der Belaaschtung vu Stressbedingungen erëm hierzestellen.
De Methylierungsphenotyp, deen duerch 5-Iodoindol a B. xylophilus induzéiert gëtt, kéint op d'Präsenz vun Jod a senger molekularer Verdeelung zeréckzeféieren sinn, well 7-Iodoindol manner hemmende Wierkung op B. xylophilus hat wéi 5-Iodoindol (Tabell 1 an Ergänzungsfigur S6). Dës Resultater sinn deelweis konsequent mat de Studien vum Maltese et al. (2014), déi bericht hunn, datt d'Translokatioun vun der Pyridyl-Stickstoffdeel an Indol vun der Para- op d'Meta-Positioun d'Vakuoliséierung, d'Wuestumshemmung an d'Zytotoxizitéit an U251-Zellen ofgeschaaft huet, wat drop hiweist, datt d'Interaktioun vum Molekül mat engem spezifesche aktive Zentrum am Protein entscheedend ass27,44,45. D'Interaktiounen tëscht Indol oder halogenéierten Indolen a GluCL-Rezeptoren, déi an dëser Studie observéiert goufen, ënnerstëtzen och dës Iddi, well 5- an 2-Iodoindol méi staark un GluCL-Rezeptoren gebonnen hunn wéi déi aner ënnersicht Indolen (Figur 6 an Ergänzungsfigur S8). Et gouf festgestallt, datt den Jod op der zweeter oder fënnefter Positioun vum Indol iwwer Réckgrat-Waasserstoffbindungen un de Leucin 218 vum GluCL-Rezeptor bindt, während aner halogenéiert Indolen an den Indol selwer schwaach Säiteketten-Waasserstoffbindungen mat Serin 260 bilden (Figur 6). Mir spekuléieren dofir, datt d'Lokalisatioun vum Halogen eng wichteg Roll bei der Induktioun vun der vakuolärer Degeneratioun spillt, während déi fest Bindung vum 5-Iodoindol den Ionenkanal op hält, wouduerch e schnelle Flëssegkeetsinflux an e Vakuolebroch méiglech sinn. Den detailléierte Wierkungsmechanismus vum 5-Iodoindol muss awer nach bestëmmt ginn.
Virun der praktescher Uwendung vu 5-Iodoindol soll seng toxesch Wierkung op Planzen analyséiert ginn. Eis Keimungsexperimenter mat Somen hunn gewisen, datt 5-Iodoindol keen negativen Effekt op d'Keimung oder déi spéider Entwécklungsprozesser bei de studéierte Konzentratioune hat (Figur 7). Dofir bitt dës Studie eng Basis fir d'Benotzung vu 5-Iodoindol an der ekologescher Ëmwelt fir d'Schiedlechkeet vu Kiefernematoden op Kiefer ze kontrolléieren.
Fréier Berichter hunn gewisen, datt eng Indol-baséiert Therapie eng potenziell Approche duerstellt fir d'Problem vun der Antibiotikaresistenz an der Kriibsprogressioun unzegoen55. Zousätzlech hunn Indole antibakteriell, antikriibs-, antioxidant, anti-inflammatoresch, antidiabetesch, antiviral, antiproliferativ an antituberkulos Aktivitéiten a kéinten als villverspriechend Basis fir d'Entwécklung vu Medikamenter déngen56,57. Dës Studie proposéiert fir d'éischt Kéier déi potenziell Notzung vu Jod als antiparasitescht an anthelminthescht Mëttel.
Avermectin gouf virun dräi Joerzéngten entdeckt a krut 2015 den Nobelpräis, a seng Notzung als Anthelmintikum gëtt nach ëmmer aktiv benotzt. Wéinst der schneller Entwécklung vun der Resistenz géint Avermectine bei Nematoden an Insektenpest ass awer eng alternativ, bëlleg an ëmweltfrëndlech Strategie néideg fir d'Infektioun mat der Pflanzwuerzelwurzel (Hafenweidenwurzel) a Pinien ze kontrolléieren. Dës Studie bericht och iwwer de Mechanismus, duerch deen 5-Iodoindol Piniennematoden ëmbréngt, an datt 5-Iodoindol eng niddreg Toxizitéit fir Planzenzellen huet, wat gutt Perspektiven fir seng zukünfteg kommerziell Uwendung opmécht.
All Experimenter goufe vum Ethikkomitee vun der Yeungnam Universitéit zu Gyeongsan, Korea, guttgeheescht, an d'Methode goufen am Aklang mat de Richtlinne vum Ethikkomitee vun der Yeungnam Universitéit duerchgefouert.
Eeër-Inkubatiounsexperimenter goufen no etabléierte Prozedure43 duerchgefouert. Fir d'Ausschlüpfrequenzen (HR) ze bewäerten, goufen 1 Dag al erwuesse Nematoden (ongeféier 100 Weibchen an 100 Männchen) a Petrischalen mat dem Pilz transferéiert a 24 Stonnen wuessen gelooss. D'Eeër goufen dann isoléiert a mat 5-Iodoindol (0,05 mM an 0,1 mM) oder Avermectin (10 μg/ml) als Suspension a sterilem destilléierte Waasser behandelt. Dës Suspensionen (500 μl; ongeféier 100 Eeër) goufen an d'Lächer vun enger Tissuekulturplack mat 24 Lächer transferéiert an bei 22 °C inkubéiert. L2-Zuelen goufen no 24 Stonnen Inkubatioun gemaach, goufen awer als dout ugesinn, wann d'Zellen sech net beweegt hunn, wéi se mat engem feine Platindrot stimuléiert goufen. Dëst Experiment gouf an zwou Etappen duerchgefouert, all mat sechs Widderhuelungen. D'Donnéeë vun deenen zwou Experimenter goufen kombinéiert a presentéiert. De Prozentsaz vun der HR gëtt wéi follegt berechent:
D'Larvesterblechkeet gouf mat virdru entwéckelte Prozedure bewäert. Nematodeneeër goufen gesammelt an Embryonen goufen duerch Ausschlüpfung a sterilem destilléierte Waasser synchroniséiert fir Larven am L2-Stadium ze generéieren. Synchroniséiert Larven (ongeféier 500 Nematoden) goufen mat 5-Iodoindol (0,05 mM an 0,1 mM) oder Avermectin (10 μg/ml) behandelt an op B. cinerea Petri-Placken opgezuucht. No 48 Stonnen Inkubatioun bei 22 °C goufen d'Nematoden a sterilem destilléierte Waasser gesammelt an op d'Präsenz vun L2-, L3- an L4-Stadien ënnersicht. D'Präsenz vun L3- an L4-Stadien huet op eng Larventransformatioun higewisen, während d'Präsenz vum L2-Stadium keng Transformatioun higewisen huet. Biller goufen mam iRiS™ Digital Cell Imaging System opgeholl. Dëst Experiment gouf an zwou Etappen duerchgefouert, all mat sechs Widderhuelungen. D'Donnéeë vun deenen zwou Experimenter goufen kombinéiert a presentéiert.
D'Toxizitéit vu 5-Iodoindol an Avermectin fir d'Somen gouf mat Hëllef vu Keimungstester op Murashige- a Skoog-Agarplacke bewäert.62 D'Somen vu B. oleracea an R. raphanistrum goufen fir d'éischt een Dag laang a sterilem destilléiertem Waasser ageweit, mat 1 ml 100% Ethanol gewäsch, 15 Minutte laang mat 1 ml 50% kommerziellem Bleechmëttel (3% Natriumhypochlorit) steriliséiert a fënnefmol mat 1 ml sterilem Waasser gewäsch. Déi steriliséiert Somen goufen dann op Keimungsagarplacke mat 0,86 g/l (0,2X) Murashige- a Skoog-Medium an 0,7% bakteriologeschen Agar mat oder ouni 5-Iodoindol oder Avermectin gedréckt. D'Placke goufen dann bei 22 °C inkubéiert, an no 3 Deeg Inkubatioun goufen Biller gemaach. Dëst Experiment gouf an zwou Etappen duerchgefouert, déi all sechs Widderhuelunge haten.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 26. Februar 2025