Planz- a Pathogenmaterialien
Eng Sorghum-Associatiounskartéierungspopulatioun, bekannt als Sorghum-Konversiounspopulatioun (SCP), gouf vum Dr. Pat Brown vun der University of Illinois (haut op der UC Davis) geliwwert. Si gouf schonn eemol beschriwwen an ass eng Sammlung vu verschiddene Linnen, déi op Photoperiod-Onempfindlechkeet a méi kleng Statur ëmgewandelt goufen, fir de Wuesstum an d'Entwécklung vun de Planzen an US-Ëmfeld ze erliichteren. 510 Linnen aus dëser Populatioun goufen an dëser Studie benotzt, obwuel wéinst schlechter Keimung an aner Qualitéitskontrollproblemer net all Linnen an der Analyse vun allen dräi Eegeschafte benotzt goufen. Schlussendlech goufen Donnéeë vun 345 Linnen fir d'Analyse vun der Chitin-Äntwert, 472 Linnen fir d'FLG22-Äntwert a 456 fir TLS-Resistenz benotzt.B. cookeiDe Stamm LSLP18 gouf vum Dr. Burt Bluhm vun der University of Arkansas kritt.
MAMP-Äntwertmessung
An dëser Studie goufen zwou verschidde MAMPs benotzt, flg22 (Genscript Katalognummer RP19986) a Chitin. Sorghumplanze goufen an Asätz ugebaut, déi op Flächen geluecht goufen, déi mat Äerd (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) am Treibhaus gefëllt waren. D'Planze goufen den Dag virun der Proufsammlung gewässert, fir extra Blatfiichtegkeet um Dag vun der Sammlung ze vermeiden.
D'Linnen goufen zoufälleg verdeelt a goufen aus logistesche Grënn a Chargen vun 60 Linnen gepflanzt. Fir all Linn goufen dräi 'Dëppen' mat zwee Somen pro Linn gepflanzt. Déi folgend Chargen goufen direkt gepflanzt, soubal déi viregt Charge veraarbecht war, bis déi ganz Populatioun bewäert war. Zwee experimentell Läff goufen fir béid MAMPs duerchgefouert, mat Genotypen, déi an all vun den zwou Läff nei zoufälleg verdeelt goufen.
ROS-Tester goufen wéi virdru beschriwwen duerchgefouert. Kuerz gesot, fir all Linn goufen sechs Somen an 3 verschiddenen Dëppen gepflanzt. Vun de resultéierende Keimlinger goufen dräi op Basis vun der Uniformitéit ausgewielt. Keimlinger, déi ongewéinlech ausgesinn hunn oder däitlech méi héich oder méi kuerz waren wéi déi meescht, goufen net benotzt. Véier Blatscheiwen mat engem Duerchmiesser vun 3 mm goufen aus dem breetsten Deel vum 4. Blat vun dräi verschiddene 15 Deeg ale Sorghumplanzen ausgeschnidden. Eng Scheif pro Blat vun zwou Planzen an zwou Scheiwen vun enger Planz, woubäi déi zweet Scheif d'Waasserkontroll war (kuckt ënnen). D'Scheiwen goufen eenzel op 50 µl H20 an enger schwaarzer 96-Lächer-Plack schwammen gelooss, mat engem Aluminiumdichtung versiegelt fir Liichtbelaaschtung ze vermeiden, an iwwer Nuecht bei Raumtemperatur gehale. Den nächsten Moien gouf eng Reaktiounsléisung mat enger 2 mg/ml Chemilumineszenter Sond L-012 (Wako, Katalognummer 120-04891), 2 mg/ml Mierrettichperoxidase (Typ VI-A, Sigma-Aldrich, Katalognummer P6782) an 100 mg/ml Chitin oder 2 μM Flg22 hiergestallt. 50 µl vun dëser Reaktiounsléisung goufen an dräi vun de véier Lächer bäigefüügt. De véierte Lächer war eng Mock-Kontroll, zu där d'Reaktiounsléisung ouni MAMP bäigefüügt gouf. Véier blann Lächer, déi nëmme Waasser enthalen hunn, goufen och an all Plack integréiert.
Nodeems d'Reaktiounsléisung bäigefüügt gouf, gouf d'Lumineszenz all 2 Minutten fir 1 Stonn mat engem SynergyTM 2 Multi-Detection Microplate Lieser (BioTek) gemooss. De Plackelieser mécht all 2 Minutten Lumineszenzmiessungen während dëser Stonn. D'Zomm vun allen 31 Liesungen gouf berechent, fir de Wäert fir all Brunn ze kréien. De geschätzte Wäert fir d'MAMP-Äntwert fir all Genotyp gouf berechent als (duerchschnëttleche Lumineszenzwäert vun den dräi experimentellen Brunne - de Mock-Brunnwäert) - minus den duerchschnëttleche Blank-Brunnwäert. D'Wäerter vun de Blank-Brunne ware konsequent no bei Null.
Blatscheiwen vunNicotiana benthamiana, eng héich reaktiounsfäeg Sorghum-Linn (SC0003) an eng schwaach reaktiounsfäeg Sorghum-Linn (PI 6069) goufen och als Kontrollen an all 96-Well-Plack fir Qualitéitskontrollzwecker abegraff.
B. cookeiImpfungsvirbereedung an Impfung
B. cookeiImpfstoff gouf wéi virdru beschriwwen virbereet. Kuerz gesot, goufen d'Sorghumkären dräi Deeg laang a Waasser ageweit, gespullt, an 1L-Konikolben geschëppt an eng Stonn bei 15psi an 121 °C autoklavéiert. D'Kären goufen dann mat ongeféier 5 ml mazeréiertem Myzel aus enger frëscher Kultur vun ... geimpft.B. cookeiLSLP18-Isolaten goufen 2 Wochen bei Raumtemperatur gelooss, woubäi d'Kolben all 3 Deeg gerëselt goufen. No 2 Wochen goufen déi mat Pilze infizéiert Sorghumkären un der Loft gedréchent an dann bei 4 °C bis zur Feldinokulatioun gelagert. Dee selwechten Impfstoff gouf fir de ganze Versuch benotzt a jiddwer Joer frësch gemaach. Fir d'Inokulatioun goufen 6-10 infizéiert Kären an de Kraal vu 4-5 Wochen ale Sorghumplanzen gesat. D'Sporen, déi vun dëse Pilze produzéiert goufen, hunn d'Infektioun bei de jonke Sorghumplanzen bannent enger Woch ausgeléist.
Somvirbereedung
Virun der Planzung um Feld goufen d'Sorghumsomen mat enger Mëschung aus Fungizid, Insektizid a Safener behandelt, déi ~ 1% Spirato 480 FS Fungizid, 4% Sebring 480 FS Fungizid an 3% Sorpro 940 ES Some-Safener enthält huet. Duerno goufen d'Somen 3 Deeg laang un der Loft gedréchent, wat eng dënn Schicht vun dëser Mëschung ronderëm d'Somen geschaf huet. De Safener huet d'Benotzung vum Herbizid Dual Magnum als Behandlung virum Opkommen erméiglecht.
Evaluatioun vun der Resistenz géint Blatflecken
Den SCP gouf an der Central Crops Research Station zu Clayton, NC, de 14.-15. Juni 2017 an den 20. Juni 2018 an engem randomiséierte komplette Blockdesign mat jeeweils zwou experimentellen Widderhuelungen gepflanzt. D'Experimenter goufen a Reie vun 1,8 m mat enger Reiebreet vun 0,9 m mat 10 Somen pro Parzell gepflanzt. Zwou Randreie goufen ronderëm de Peripherie vun all Experiment gepflanzt, fir Randeffekter ze vermeiden. D'Experimenter goufen den 20. Juli 2017 an den 20. Juli 2018 geimpft, zu deem Zäitpunkt waren d'Sorghumpflanzen an der Wuestumsstadium 3. D'Bewäertunge goufen op enger Skala vun engem bis néng gemaach, wou Planzen, déi keng Zeeche vun enger Krankheet gewisen hunn, als néng a komplett dout Planzen als eent bewäert goufen. Zwou Bewäertunge goufen am Joer 2017 an véier Miessunge am Joer 2018 gemaach, ugefaange vun zwou Wochen no der Impfung all Joer. sAUDPC (standardiséiert Fläch ënner der Krankheetsprogressiounskurve) gouf wéi virdru beschriwwen berechent.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 01.04.2021