Planz a Pathogen Materialien
A Sorghum Associatioun Kartéierung Populatioun bekannt als Sorghum Konversioun Bevëlkerung (SCP) gouf vum Dr Pat Brown op der University of Illinois geliwwert (elo um UC Davis).Et gouf virdru beschriwwen an ass eng Sammlung vu verschiddenste Linnen ëmgewandelt zu Photoperiod-Onsensibilitéit a méi kleng Statur fir de Wuesstum an d'Entwécklung vun de Planzen an US Ëmfeld ze erliichteren.510 Linnen aus dëser Bevëlkerung goufen an dëser Etude benotzt, obwuel wéinst schlechter Keimung an aner Qualitéitskontrollproblemer net all d'Linnen an der Analyse vun allen dräi Charaktere benotzt goufen.Schlussendlech goufen Daten aus 345 Linnen fir d'Analyse vun der Chitin Äntwert benotzt, 472 Linnen fir d'flg22 Äntwert, an 456 fir TLS Resistenz.B. cookeiStamm LSLP18 gouf vum Dr Burt Bluhm op der University of Arkansas kritt.
MAMP Äntwert Miessung
Zwee verschidde MAMPs goufen an dëser Etude benotzt flg22, (Genscript Katalog # RP19986), a Chitin.Sorghum Planzen goufen an Inserts ugebaut, déi op Appartementer gefüllt sinn mat Buedem (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) am Treibhauseffekt ugebaut.D'Planzen goufen den Dag virun der Sammlung vun der Probe bewässert fir extra Blatfeuchtigkeit am Dag vun der Sammlung ze vermeiden.
D'Linnen goufen randomiséiert an aus logistesche Grënn a Chargen vun 60 Linnen gepflanzt.Fir all Zeil goufen dräi "Dëppen" mat zwee Somen pro Zeil gepflanzt.Déi spéider Chargen goufen gepflanzt soubal déi viregt Batch veraarbecht gouf bis déi ganz Bevëlkerung bewäert gouf.Zwee experimentell Lafen sech fir béid MAMPs mat genotypes nees zoufälleg an jiddereng vun den zwee Lafen gehaal.
ROS Assays goufen duerchgefouert wéi virdru beschriwwen.Kuerz gesot, fir all Zeil goufen sechs Somen an 3 verschiddene Poten gepflanzt.Vun de resultéierende Séiwierker goufen dräi ausgewielt op Basis vun der Uniformitéit.Seedlings déi ongewéinlech ausgesinn oder wesentlech méi héich oder méi kuerz waren wéi d'Majoritéit goufen net benotzt.Véier Blatscheiwen vun 3 mm Duerchmiesser goufen aus dem breetsten Deel vum 4. Blat vun dräi verschiddenen 15 Deeg alen Sorghumpflanzen ausgeschnidden.Eng Scheif pro Blat vun zwou Planzen an zwee Scheiwen vun enger Planz, mat der zweeter Scheif gëtt d'Waasserkontrolle (kuckt hei ënnen).D'Discs goufen individuell op 50 μl H20 an enger schwaarzer 96-Well Plack gefloss, mat engem Aluminiumsiegel versiegelt fir Belaaschtung fir Liicht ze vermeiden, an iwwer Nuecht bei Raumtemperatur gehal.Den nächste Moien gouf eng Reaktiounsléisung gemaach mat 2 mg / ml chemilumineszenter Sonde L-012 (Wako, Katalog # 120-04891), 2 mg / ml Meerrettich Peroxidase (Typ VI-A, Sigma-Aldrich, Katalog # P6782), an 100 mg / ml Chitin oder 2 μM vun Flg22.50 μl vun dëser Reaktiounsléisung gouf an dräi vun de véier Wells bäigefüügt.Déi véiert Brunn war eng Spottkontroll, op déi d'Reaktiounsléisung ausser de MAMP bäigefüügt gouf.Véier eidel Wells mat nëmme Waasser waren och an all Plack abegraff.
Nodeem d'Reaktiounsléisung bäigefüügt gouf, gouf d'Lumineszenz mat SynergyTM 2 Multi-Detektioun Mikroplate Lieser (BioTek) all 2 min fir 1 Stonn gemooss.De Plack Lieser hëlt Lumineszenzmiessungen all 2 min während dëser 1 h.D'Zomm vun all 31 Liesungen gouf berechent fir de Wäert fir all Well ze ginn.De geschätzte Wäert fir d'MAMP Äntwert fir all Genotyp gouf berechent als (Duerchschnëttslumineszenzwäert vun den dräi experimentellen Wells - de Spott-Well-Wäert) -minus den duerchschnëttleche eidel gutt Wäert.Déi eidel Well Wäerter ware konsequent no bei Null.
Leaf discs vunNicotiana benthamiana, eng héich reaktiounsfäeger Sorghum Linn (SC0003), an eng niddereg reaktiounsfäeger Sorghum Linn (PI 6069) goufen och als Kontrollen an all 96-gutt Plack fir Qualitéitskontroll Zwecker abegraff.
B. cookeiInokulatioun an Inokulatioun
B. cookeiInokulum gouf virbereet wéi virdru beschriwwen.Kuerz gesot, d'Sorghum-Kären goufen dräi Deeg am Waasser getäuscht, gespullt, an 1L konesch Flaschen geschaaft an eng Stonn bei 15psi an 121 °C autoklavéiert.D'Käre goufen duerno mat ongeféier 5 ml vu maceréierten Mycelien aus enger frëscher Kultur vunB. cookeiLSLP18 isoléiert a verlooss fir 2 Wochen bei Raumtemperatur, all 3 Deeg rëselt d'Fläschen.No 2 Wochen goufen d'Pilz-infestéiert Sorghum-Kären an der Loft gedréchent an duerno bei 4 ° C bis d'Feldinokulatioun gelagert.Datselwecht Inokulum gouf fir de ganze Prozess benotzt an all Joer frësch gemaach.Fir d'Inokulatioun goufen 6-10 infestéiert Kären an d'Wuerzel vun 4-5 Wochen alen Sorghumpflanzen plazéiert.D'Spore produzéiert aus dëse Pilze hunn d'Infektioun an de jonke Sorghumpflanzen bannent enger Woch initiéiert.
Seed Virbereedung
Virun Planzung am Feld gouf d'Sorghum Somen mat engem Fungizid, Insektizid, a Safener Mëschung behandelt mat ~ 1% Spirato 480 FS Fungizid, 4% Sebring 480 FS Fungizid, 3% Sorpro 940 ES Som Safener.Duerno goufen d'Somen fir 3 Deeg an der Loft getrocknt, wat eng dënn Beschichtung vun dëser Mëschung ëm d'Somen huet.De Safener huet d'Benotzung vum Herbizid Dual Magnum als Virausbehandlung erlaabt.
Evaluatioun vun Target Leaf Spot Resistenz
De SCP gouf an der Central Crops Research Station zu Clayton, NC am Juni 14-15 2017 an Juni 20, 2018 an engem randomiséierte komplette Blockdesign mat zwee experimentellen Replikatiounen an all Fall gepflanzt.Experimenter goufen an 1,8 m eenzel Reihen mat enger Zeilbreet vun 0,9 m gepflanzt mat 10 Somen pro Plot.Zwee Grenzreihen goufen ronderëm d'Peripherie vun all Experiment gepflanzt fir Randeffekter ze vermeiden.D'Experimenter goufen den 20. Juli 2017 an den 20. Juli 2018 inokuléiert, an deem Punkt waren d'Sorghumpflanzen am Wuesstumsstadium 3. Bewäertunge goufen op enger Skala vun engem bis néng geholl, wou Planzen, déi keng Zeeche vu Krankheet weisen, als néng a komplett geschoss goufen. doudege Planzen goufen als ee geschoss.Zwee Bewäertunge goufen am Joer 2017 geholl a véier Liesungen am Joer 2018 ugefaang all Joer zwou Wochen no der Impfung.sAUDPC (standardiséierte Beräich ënner Krankheet Werdegang Kéier) war berechent wéi virdru beschriwwen.
Post Zäit: Apr-01-2021